发布时间：2025-02-19
一、细菌污染
- 引起原因：操作不规范或无菌措施不到位等。
- 细菌污染种类：白色葡萄球菌，大肠杆菌，假单孢菌、枯草杆菌等。
- 细胞污染后的变化：
1、污染后由于有大量酸性物质产生，因此培养基会短时间内由红色变为黄色；
2、由于细菌大量增殖，培养基变浑浊，稍微振荡后可见培养基表面有漂浮物；
3、普通倒置显微镜高倍镜观察，胞浆内可见大量颗粒；
4、细胞生长缓慢，逐渐变圆脱落。
细菌污染
细菌污染的经典案例分享
预防办法及解决策略
1、在培养液中添加双抗（P/S）处理；可用抗生素的常用量的5-10倍作冲击疗法，用药24-48h后再换常规培养液；
2、添加西司他丁钠和亚胺培南（泰能）处理细胞，适用于培养用具被打翻、使用了污染的培养液或要培养污染的组织或者冻存细胞的污染情况；
3、裸鼠体内接种法是比较有效和彻底的除菌方法。主要包括腹水接种和皮下荷瘤分离细胞。既能彻底清除污染细菌，又能保存肿瘤细胞的来源特征和恶性特性。对于一些特别珍贵的肿瘤细胞，可采用裸鼠体内接种法。
二、真菌污染
- 引起原因：操作不规范或无菌措施不到位等。
- 细菌污染种类：白色念珠菌，酵母菌，黑霉菌，曲霉菌，孢子菌等。
- 细胞污染后的变化：
1、一般来说，培养液不会变浑浊；
2、比较容易发现，肉眼可见点状菌落（淡黄色或者白色）漂浮在培养基表面；
3、普通倒置显微镜下观察，可见絮状交错的菌丝或菌团生长在细胞之间；有时真菌并不是直接分布于细胞贴壁层，需要通过显微镜仔细观察寻找菌丝或菌团。
真菌污染
真菌污染的经典案例分享
预防办法及解决策略：
1、添加制霉菌素和两性霉素B，但是对细胞的毒性也较大；
2、环境彻底消毒：先后用酒精、新洁尔擦洗培养箱；水盘加上饱和量的硫酸铜。
3、若细胞不是特别珍贵，建议丢弃。
三、支原体污染
支原体是一种自然界中能独立生活的最小微生物，能通过细菌滤器，在细胞培养过程中，支原体感染发生率很高。由于支原体可以与细胞共存，生长速率受影响较小，而被忽视。支原体污染在细胞培养污染中最为隐蔽和最难察觉，但是支原体能明显影响宿主细胞代谢、RNA合成及基因表达的作用，因此越来越受到重视。
- 引起原因：主要来源于是已感染支原体细胞之间的交叉污染，支原体感染的血清和胰酶等。
- 细胞污染后的变化：
1、培养液不变浑浊，但会很快变成黄色；
2、多数细胞在形态方面少有明显变化；
3、在倒置显微镜下可见胞浆出现小颗粒或空泡。
支原体污染
支原体污染的经典案例分享
预防办法及解决策略
1、定期用支原体试剂盒检测；
2、换液可以减缓污染情况，但无法根除；
3、支原体清除试剂盒可以达到较好效果；
4、小鼠腹腔巨噬细胞清除法；
5、若细胞不是特别珍贵，建议丢弃。
四、细胞交叉污染
- 引起原因：两种或两种细胞以上的实验同时进行，实验器具、试剂等混用而易造成的污染。
- 检测手段：可通过镜检观察细胞形态是否与所培养细胞形态一致来判断，另外还可以通过各种免疫学试验、同工酶分析及细胞遗传学方法来确定。
- 处理方式：针对交叉污染较难清除，建议丢弃细胞重新培养。
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