发布时间：2024-09-23
在研究项目中，当样本进出外部来源时，当需要在不同时间收集样本时，或者仅仅当样本不能一次性处理时，通常需要储存新鲜器官和固体组织样本。在这些情况下，短期储存可以在几天内充分灵活地进一步处理组织。为了分析储存组织中的活细胞，必须避免储存期间的坏死和凋亡。此外，必须防止细胞的激活，以及细胞的多能性的改变，以保持细胞的生理和功能状态。一种常见的储存方法是冷冻组织样本，但这往往导致解冻后的高细胞死亡，是运输的一个挑战。
为了克服所有这些问题，培镨生物为您推荐MACS组织存储解决方案，它允许在2-8°C下最佳地存储新鲜固体组织至少48小时。在这一储存期内，细胞的活力、细胞的功能和激活状态得到了保存，并阻止了细胞应激相关基因的诱导。MACS组织存储溶液已经在各种人类和小鼠组织中进行了测试，包括肿瘤、肺、脾脏、大脑和骨骼肌。
在这里，我们展示了如何使用MACS组织存储溶液来保存小鼠肿瘤长达48小时。分析了肿瘤浸润性白细胞（TIL）群体的细胞活力和组成，以及在不同储存时间点的细胞应激相关基因的表达情况。
材料和方法
收集小鼠CT26肿瘤，并切成相似大小的碎片。将相同数量的肿瘤片分配到两个15 mL管中，包含5 mL的5 mL，在2-8°C下保存24和48小时。新鲜和储存的肿瘤片在每个指定的时间点以相同的方式处理。
肿瘤解离
根据相应数据表中提供的说明，使用温和的MACS™Octo分离器和肿瘤分离试剂盒，小鼠分离肿瘤。（该数据表可在产品页面上直接下载）。解离后，用MACS智能过滤器（70µm）过滤获得的单细胞悬液。一部分细胞用于流式细胞仪分析，其余细胞保存在RLT缓冲液（Qiagen）中，直到进一步进行基因表达分析。
流式细胞检测分析
使用以下抗小鼠REA发现®抗体分析TIL群体： CD45（REA737）、CD3（REA614）、CD25（REA568）、CD69（REA937）、CD4（REA604）、CD8a（REA601）、CD19（REA749）、CD80（REA983）和CD86（REA1190）。样品使用MACSQuant®分析仪10进行分析。用碘化丙啶排除死亡细胞。排除死亡细胞后，从门控CD45+活细胞中分析TIL群体。
基因表达分析
使用RNeasy®Mini Kit（Qiagen）从新鲜细胞和存储的细胞中分离RNA。使用RT2®第一链试剂盒（Qiagen）生产cDNA，使用RT2®PCR阵列（®）和基因全球®分析工具(Qiagen）。
结果
CT26肿瘤在收集当天或在MACS组织存储液中保存24和48小时后，将细胞活力和细胞群组成保存48小时。解离后，用流式细胞术分析TILs的总细胞活力和组成。新鲜和储存样品的细胞活力均超过85%（图1A）。此外，随着时间的推移，TILs的组成也得到了保留（图1B）。通过分析激活标记物CD25、CD69、CD80和CD86在特定TIL群体中的表达，观察到细胞的激活状态也被保留了下来。
图1： CT26小鼠肿瘤在4°C的MACS组织存储溶液中保存24或48小时。解离后，用流式细胞术分析细胞总活力(A)和TIL组成(B)。细胞频率是指活的CD45+细胞。此外，CD3+和CD19+细胞亚群的频率分别是指相应的亲本CD3+和CD19+群体。
图2：来自新鲜和储存的肿瘤细胞中细胞应激相关基因的表达。从CT26肿瘤的新鲜细胞和储存的细胞中分离RNA，并分析细胞应激相关基因的表达。热图显示了与新鲜组织相比，表达率的倍数变化。
在MACS组织存储液中存储过程中阻止细胞应激相关基因的表达
分子分析的一个主要关注点是，贮藏条件诱导细胞应激和基因表达的变化。这是通过分析与细胞应激通路相关的基因的表达来研究的。将保存的样品与新鲜样品的基因表达量进行比较。保存24或48小时后，细胞应激相关基因的表达没有明显变化，基因表达与新鲜样本的细胞相当（图2）。
结论
•MACS组织存储解决方案为不同组织样本和器官的短期存储提供了一种稳健而方便的解决方案。
•细胞活力、细胞组成和细胞激活状态保存至少48小时。
•最后，MACS组织存储溶液可以防止细胞应激反应，因为与新鲜样品材料相比，细胞应激相关基因表达水平的变化保持在最小水平。
| 产品 | 货号 |
| MACS Tissue Storage Solution | 130-100-008 |
| gentleMACS Octo Dissociator with Hearts | 130-096-427 |
| Tumor Dissociation Kit，mouse | 130-096-730 |
| MACS SmarStrainers（70um） | 130-098-462 |
| MACSQuant Analyzer 10 | 130-096-343 |
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