人 NK细胞

发布时间：2025-01-07

1、NK细胞

自然杀伤细胞（Natural Killer Cell，简称NK细胞）是人体免疫系统中的一种重要免疫细胞。它们属于淋巴细胞，主要来源于骨髓淋巴样干细胞。NK细胞是天然免疫系统的核心细胞之一，约占血液中所有免疫细胞（白细胞）数量的15%。

2、来自外周血的NK细胞

基于NK细胞的CD分子表达，已经鉴定出两种不同的人类NK细胞亚群：CD56dim和CD56bright NK细胞（PMID: 3086432）。这些NK细胞亚群缺乏CD3表达，在表型和功能上是不同的。而在自然杀伤T细胞（NKT）中，它们在其表面表达CD56标记物的同时NK表达CD3。其他NK细胞亚群可根据其组织分布进行鉴定。与外周血NK细胞相比，这些细胞具有不同的功能库和效应功能。

3、外周血NK细胞亚型

细胞亚型	细胞占比	marker	细胞功能
CD16brightCD56dim/+ NK cells	≥90%外周血中的NK细胞	CD16+, CD56+, KIRs+, CCR7–, L-selectin–	细胞毒性 抗体依赖性细胞介导的细胞毒性 细胞因子分泌
CD16dim/–CD56bright NK cells	≤10%外周血中的NK细胞	CD56+, KIRs–/low, CCR7+, L-selectin+	细胞因子分泌 免疫调节 增殖能力

    大部分健康人外周血中NK细胞表达CD56^dim (90%) 和高表达 CD16; 少部分NK细胞 (10%) 表达CD56^bright 和CD16^dim/neg。
    CD56^brightNK细胞不表达CD16，表达低水平CD69、杀伤细胞免疫球蛋白样受体（KIRs）和细胞内穿孔素（PMID: 15536127）。还是强有力的细胞因子生产者，能够分泌多种细胞因子；表达高/中亲和IL-2受体，在体外和体内对低剂量IL-2的反应中具有扩增能力（PMID: 7678599, 1692080）。在被IL-2或IL-12激活后，CD56^bright细胞对靶标表现出与CD56^dim细胞相似或增强的细胞毒性。

    CD56^dim NK细胞表达KIRs和CD16，缺乏CCR7和L-selectin，被认为是终末分化的成熟NK细胞，富集于骨髓、血液和脾脏（PMID:12480696,15536127,16606675）。CD56^dim NK细胞是天然和抗体依赖性靶细胞裂解的细胞溶解和高效效应器。与CD56^bright NK细胞相比，静息的CD56^dim NK细胞仅表达中等亲和力的IL-2受体，并且在体外对高剂量IL-2的反应中增殖较弱（PMID: 1370410）。

4、NK细胞和NKT细胞在外周血中的表达分子和美天旎分选磁珠

样本	分选类型	概述	产品
全血	阳选	CD56主要在NK和NKT细胞上表达	StraightFrom Whole Blood CD56 MicroBead Kit, human
Buffy coat	阳选	CD56主要在NK和NKT细胞上表达	StraightFrom Buffy Coat CD56 MicroBead Kit, human
白细胞还原系统室（LRSC）	阳选	CD56主要在NK和NKT细胞上表达	StraightFrom LRSC CD56 MicroBead Kit, human
全血	去除分选		MACSxpress NK Cell Isolation Kit, human

StraightFrom®CD56 MicroBead试剂盒可以直接从全血、Buffy coat或LRSC中快速分离CD56+细胞。不需要事先样品制备，并针对特定的起始材料进行了优化。搭配使用CD3 MicroBeads去除CD3+细胞，可获得高纯度的NK细胞。

应用案例

StraightFrom®CD56 MicroBead

                               分选前                                                                          分选后

                                               

Buffer coat 中CD56+细胞的快速分离。使用StraightFrom Buffy Coat CD56 MicroBead试剂盒和带单柱适配器和全血柱的MultiMACS™Cell24 Separator Plus进行分离。用CD56-PE、CD3-APC和CD45-VioBlue®对细胞进行荧光染色，并在MACSQuant®分析仪上进行流式细胞术分析。细胞通过CD45-VioBlue触发。在散射信号和碘化丙啶荧光的分析排除了细胞碎片和死细胞。

MACSxpress NK Cell Isolation Kit, human

                                                                     分选前                                                                                                                                   分选后

                                                                             

使用MACSxpress NK细胞分离试剂盒，MACSmix™管旋转器和MACSxpress分离器从30ml人edta抗凝全血中分离NK细胞。分离的细胞用CD45-VioBlue、CD3-FITC和CD56-PE进行荧光染色，并使用MACSQuant Analyzer进行流式细胞术分析。基于CD45表达、散射信号和碘化丙啶荧光，排除细胞碎片、非白细胞和死细胞。

5、NK细胞和NKT细胞在PBMCs中的表达分子和美天旎分选磁珠

样本	分选类型	概述	产品
PBMCs	阳选	CD56主要在NK和NKT细胞上表达。	CD56 MicroBeads, human
PBMCs	去除分选		NK Cell Isolation Kit, human
PBMCs		CD56主要在NK和NKT细胞上表达。抗体/微珠标记可解离。	REAlease CD56 MicroBead Kit, human

全血样品可以通过梯度密度离心获取PBMCs，PBMCs作为分选的起始样本；CD56 MicroBeads, human通过直接磁标记实现CD56+细胞的阳性选择或去除。通过 REAlease® CD56 MicroBead Kit, human进行阳性选择，然后用CD3 MicroBeads,human去除CD3+细胞，得到高纯度的非活化NK细胞。

应用案例

REAlease CD56 MicroBead Kit, human

获取非活化高纯度NK细胞。第一步，使用REAlease CD56 MicroBead Kit， human富集CD56+细胞。去除REAlease MicroBeads后，用CD3 MicroBeads， human从CD56+细胞群中去除CD3+细胞部分，得到纯度高达98%的CD56+CD3 - NK细胞。分离后流式细胞术检测CD69和CD25水平表明NK细胞未被激活。

NK Cell Isolation Kit, human

从PBMCs中分离未标记的人NK细胞。样品使用NK Cell Isolation Kit, human、LS柱和MidiMACS™分离器进行处理。用CD56-PE、CD3 FITC和CD45-VioBlue对细胞进行荧光染色，然后在MACSQuant分析仪上进行流式细胞术分析。细胞通过CD45-VioBlue圈门。基于散射信号和碘化丙啶荧光的分析排除了细胞碎片和死细胞。

6、NK细胞和NKT细胞亚群在PBMCs中的表达分子和美天旎分选磁珠

样本	分选类型	概述	产品
PBMCs	非目的细胞去除后再目的细胞	基于CD8标记的CD56+CD8+细胞的分离	CD56+CD8+/CD8– NK Cell Isolation Kit, human
PBMCs	非目的细胞去除后再目的细胞	基于CD16标记的CD56+CD16+细胞的分离	CD56+CD16+ NK Cell Isolation Kit, human
PBMCs	非目的细胞去除后再目的细胞	去除非nk细胞和CD56+CD16+细胞，然后根据CD56标记分离CD56+CD16 -	CD56+CD16– NK Cell Isolation Kit, human

上表列出了针对不同NK细胞亚群的专用试剂盒。然而，使用REAlease CD56 MicroBead试剂盒，结合适当的额外细胞分离试剂，也可以分离任何亚群。REAlease CD56 MicroBeads能够对CD56+细胞（NK和NKT细胞）进行阳性选择。然后可以去除细胞上的标记，再进行第二次标记和基于所需标记的阳性选择。

7、关于NK细胞培养扩增

NK细胞培养扩增适用的产品

产品类型	概述	产品	品牌
培养基	促进NK细胞的增殖和活化，减少不需要的细胞（T细胞，B细胞，dc等）的生长。	NK MACS Medium	美天旎
	适用于不添加自体血浆和血清替代物的多种免疫细胞培养，包括T细胞，NK细胞等。	淋巴细胞无血清培养基KBM591	康宁
营养补充物	高质量的重组细胞因子，成功的细胞培养。可提供优质，研究和GMP等级。	MACS Cytokines	美天旎
激活试剂	基于细胞大小的粒子装载了活化抗体。	NK Cell Activation/Expansion Kit, human	美天旎
	专为NK细胞设计全套培养套装，使用方便	NK Cell Culture Kit II	康宁

应用案例

美天旎NK MACS培养基

NK细胞在NK MACS培养基中的扩增率更高。(A) pbmc （n = 3）和(B) NK细胞（n = 3）分别用5%的AB血清和500 IU/mL的IL-2扩增NK细胞。NK MACS培养基的增殖率显著高于标准培养基。

NK MACS培养基从PBMCs中扩增后产生大量NK细胞。PBMCs中NK细胞在NK MACS培养基中扩增14天后的细胞组成分析显示，与不同标准培养基相比，NK细胞的比例更大。NK细胞（CD3 - CD56+）、T细胞（CD3+）、NKT细胞（CD3+CD56+）和其他细胞（CD3 - CD56 -）。

美天旎NK激活试剂盒

NK Cell Activation/Expansion Kit, human是基于大细胞大小的颗粒装载生物素化抗体CD2和CD335 （NKp46）激活和扩增原代细胞。这些颗粒模拟抗原呈递细胞，当以特定的头细胞比应用时，导致有效的NK细胞激活。

使用NK细胞活化/扩增试剂盒扩增NK细胞。从NK细胞分离试剂盒（NK Cell Isolation Kit, human, n = 2）分离的NK细胞开始，在第1天使用NK细胞激活/扩增试剂盒（NK Cell Activation/Expansion Kit, human, n = 2）刺激细胞，或者在仅含IL - 2的培养基中不刺激细胞。

康宁NK培养扩增试剂盒

图1.培养10天后NK细胞的形态。培养于NK无血清培养试剂盒II、NK培养试剂盒、其他品牌同类产品I和其他品牌同类产品Y10天后的NK细胞。以上为随机选择的照片。比例尺：200µm。

如图2和图3所示，NK细胞在分别利用NK无血清培养试剂盒II和NK培养试剂盒培养14天后扩增了230倍和200倍，总细胞数量分别为7x 10⁹个细胞和6x10⁹个细胞，比其他品牌同类产品I的培养试剂盒（只达到70倍的扩增）多了3倍。利用其他品牌同类产品Y的培养试剂盒培养的NK细胞呈比较差的扩增表现，这也与其细胞形态学观察结果一致。

将5×10⁵个及1×10⁶个效应细胞（NK细胞）/mL分别与1×10⁵个靶细胞（K562细胞）/mL在96孔微孔板（100 µL）中混合后置于含5%CO2的培养箱中在37℃下隔夜共培养。分析前在每孔细胞均加入10µL的细胞计数试剂盒8（CCK-8）试剂（Sigma目录编号：96992）并进一步在37℃下孵育4小时后利用SpectraMax M4^®（Molecular Devices）多功能微孔板检测仪读取吸光度数据。在 E/T比例为5的状况下，康宁NK无血清培养试剂盒II与其他品牌同 类产品I（70％）和其他品牌同类产品Y（60％）相比具有更强的 细胞毒性（100％）。

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