人 Pan T细胞

发布时间：2025-01-13

1、人Pan T细胞

T细胞（T淋巴细胞）是淋巴细胞的一种，主要参与细胞介导的免疫反应。T细胞在骨髓中生成后，在胸腺内成熟，因此得名T细胞。它在免疫系统中扮演着重要角色，通过细胞表面的T细胞受体（TCR）识别并结合特定抗原，从而激活免疫反应。作为适应性免疫的一部分，T细胞在执行和控制免疫应答中发挥着不可或缺的作用。

从胸腺细胞成熟的T细胞经历了几个发育阶段：在胸腺中选择后，它们作为幼稚T细胞在体内循环，每个幼稚T细胞都具有独特的抗原特异性。当遇到抗原时，它们被激活，分化成特定的亚型，扩增，并履行其作为效应细胞的作用，例如，通过迁移到各种组织和器官。为了持久的免疫记忆，一些抗原激活的T细胞分化成各种记忆T细胞亚型。Pan T细胞是指人体中所有T细胞及其亚群的总称，包括辅助性T细胞（CD4+）、调节性T细胞（CD4+CD25+CD127-）、细胞毒性T细胞（CD8+）等。这些细胞是适应性免疫系统的重要组成部分，能够协调对病原体或肿瘤的免疫反应。

2、T细胞亚群分布

在人类外周血中，所有CD45+白细胞中有15-30%是T细胞，其中CD4+ T细胞约占T细胞总数的三分之二，CD8+ T细胞占其余三分之一。在分离的pbmc中，T细胞占总细胞的45-70%，是迄今为止最丰富的细胞类型。总pbmc中约高达60%是CD4+ T细胞，高达30%是CD8+ T细胞。

3、外周血中T细胞亚群分布情况

细胞类型/亚群	占比	marker	功能
总T细胞	在外周血CD45+白细胞中占15-30%	CD45，CD3，CD2，CD5，CD6	适应性免疫反应的调节因子和效应因子
CD4+ T辅助	在外周血CD45+白细胞中占9-20%	CD45，CD3，CD4	适应性免疫反应的调节因子；分泌细胞因子来指导免疫过程；刺激B细胞成熟；激活细胞毒性T细胞和巨噬细胞分化为各种亚群（如TH1， TH2, TH17）
CD4+CD25+调节性T细胞	在外周血CD45+白细胞中<1%	CD45, CD3, CD4, CD25	终止免疫应答抑制自身反应性T细胞维持免疫耐受efoxp3作为决定性转录因子
CD8+细胞毒性T细胞	5-10%的外周血CD45+白细胞	CD45，CD3，CD8	细胞免疫应答的执行者抗原特异性杀伤，如病毒感染细胞和肿瘤细胞sfas或颗粒酶、穿孔素和颗粒酶介导的杀伤
TCRγ/δ+ T cells	<10%的外周血中T细胞	γ/δ TCR+, CD3, CD4+/–, CD8+/–	“非常规”T细胞亚型，在应激抗原反应中表现出抗原呈递和细胞毒性。在没有MHC分子的情况下识别抗原
自然杀伤T细胞（NKT细胞）	外周血中小于3%的T细胞	CD45, CD3, CD56, CD16, NK1.1, granzyme	识别非多态性抗原呈递CD1d分子而非MHC分子（在识别如结核分枝杆菌的糖脂等方面很重要）
Double-negative T cells (DNTs)	在外周血总T细胞中占1-3%	α/β TCR+, CD3	表达α/β TCR，但缺乏CD4或CD8以及典型的NKT细胞标记物的表达，可能在免疫应答的下调中起作用

T细胞亚型可大致分为辅助T细胞（CD4+）、细胞毒性T细胞（CD8+）、调节性T细胞（CD4+CD25+FoxP3+）和“非常规”T细胞亚型，如γ/δ T细胞、NKT细胞和双阴性T细胞。因此，T细胞一般可通过CD3和CD4或CD8的表达来识别。其他指标可用于进一步区分亚型。

大多数T细胞亚型在被各自的抗原激活后可以经历记忆分化步骤。除了分化为效应T细胞外，一些幼稚T细胞（Naive T Cells）还可以分化为各种记忆T细胞亚群，如干细胞样记忆T细胞（TSCM）、中枢记忆T细胞（TCM）、效应记忆T细胞（TEM）和效应记忆RA+ T细胞（TEMRA）。每个不同的子集由不同的表面marker定义。无抗原T细胞表达初始标记物CD45RA，以及归巢受体CD62L和CCR7，但缺乏CD45RO和CD95的表达。随着向记忆表型的持续分化，CD45RA、CD62L和CCR7下调，而记忆标记CD45RO和激活标记CD95逐渐上调。随着记忆表型的逐渐分化，抗原依赖性、组织趋向性、效应功能和衰老增加（PMID: 24258910, 26999211）。

人T细胞从初始幼稚T细胞向记忆T细胞分化（PMID: 24258910, 26999211）。

通常，对特定抗原特异性的幼稚T细胞数非常低，范围在总T细胞计数的0.01至0.001%之间，这取决于各自的特异性。当一个幼稚的T细胞遇到它的同源抗原并因此被激活时，克隆扩增开始，将这些抗原特异性T细胞的频率提高了几个数量级。通过这种方式，它们可以有效地在免疫应答中发挥效应器的作用（PMID: 22517866, 17707129）。

大多数克隆扩增的抗原特异性T细胞在免疫反应终止后死亡，但有一小部分作为记忆T细胞存活。记忆T细胞寿命长，在再次暴露于同源抗原后，可以迅速扩增成大量效应T细胞。出生时，T细胞库几乎完全由幼稚T细胞组成。随着年龄的增长和抗原经历，记忆T细胞可能成为最丰富的T细胞群，占所有循环T细胞的35% （PMID: 24336101）。

4、从外周血中分离T细胞

起始样本	分选类型	描述	产品
全血	去除分选	在30分钟的时间内可直接分离多达30ml全血Pan T细胞。	MACSxpress® Whole Blood Pan T Cell Isolation Kit, human
白膜层	去除分选	在30分钟的时间内可直接从白膜层细胞分离Pan T细胞。	MACSxpress® Buffy Coat Pan T Cell Isolation Kit, human
白细胞还原系统室（LRSC）	去除分选	在30分钟的时间内可直接从LRSC分离Pan T细胞。	MACSxpress® LRSC Pan T Cell Isolation Kit, human
全血	阳性分选	可直接从全血样本中分离Pan T细胞	StraightFrom® Whole Blood CD3 MicroBeads, human

StraightFrom® Whole Blood CD3 MicroBeads, human，可用于直接从全血中快速阳性分离CD3+ T细胞。该试剂盒不需要进行样品制备，如密度梯度离心，红细胞溶解，或细胞计数。
应用案例：

                                                      分选前                                                          分选后

                                                                                            

从全血中标准化和快速分离CD3+ T细胞。使用StraightFrom® Whole Blood CD3 MicroBeads, human搭配MultiMACS™Cell24 Separator Plus从全血中分离CD3+ T细胞。用CD3-PE、CD14 - APC和CD45-VioBlue对细胞进行荧光染色，在MACSQuant®分析仪上进行流式细胞术分析。细胞通过CD45-VioBlue圈门。基于散射信号和碘化丙啶荧光的分析排除了细胞碎片和死细胞。

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MACSxpress® Whole Blood Pan T Cell Isolation Kit, human可以直接从更大体积的全血（总容量3x30 mL）中分离未标记的Pan T细胞，且无需密度梯度离心。使用MACSxpress Beads通过免疫磁性去除非靶细胞，同时沉淀红细胞以产生高纯度的未接触靶细胞。基于MACSxpress技术的类似试剂盒还可用于从白膜层或LRSC中分离Pan T细胞。

              分选前                                                                                                      分选后

                                                           

从30ml人edta抗凝全血中分离未标记的Pan T细胞。样品使用MACSxpress® Whole Blood Pan T Cell Isolation Kit, human、MACSmix™管旋转器和MACSxpress分离器进行处理。分离得到的细胞用CD45-VioBlue、CD3- fitc、CD3- APC、CD2-PE和CD56-PE进行荧光染色，然后在MACSQuant分析仪上进行流式细胞术分析。基于CD45表达圈门、散射信号和碘化丙啶荧光，排除细胞碎片、非白细胞和死细胞。

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5、从PBMCs中分离Pan T细胞

起始样本	分选类型	描述	产品
PBMCs	阳性分选	CD2是最早的T细胞标志物之一，参与胸腺发育。	CD2 MicroBeads, human
PBMCs	阳性分选	CD3在所有T细胞上表达，是最可靠的Pan T细胞标志物。还可以用于从混合细胞悬浮液去除T细胞。	CD3 MicroBeads, human
PBMCs	阳性分选后去除标记物	该试剂盒允许分离无标记的CD3+细胞，因为分离后可以从细胞表面释放完整的标记复合物。	REAlease CD3 MicroBead Kit, human
PBMCs	去除分选	高纯度T细胞的分离可以通过去除非靶细胞来实现：单核细胞、中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、B细胞、干细胞、树突状细胞、NK细胞、粒细胞和红细胞。	Pan T Cell Isolation Kit, human

与直接处理全血磁珠不同，样品需要通过密度梯度离心处理，预富集外周血单个核细胞（PBMCs），作为后续T细胞分离的起始样本。
Pan T Cell Isolation Kit, human试剂盒可在18分钟内从pbmc中快速分离未标记的T细胞。非T细胞（即单核细胞、中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、B细胞、干细胞、树突状细胞、NK细胞、粒细胞和红细胞）用生物素结合的CD14、CD15、CD16、CD19、CD34、CD36、CD56、CD123和CD235a（糖蛋白a）抗体混合物进行标记。随后，用Pan T细胞微珠混合物对这些非靶细胞进行磁性标记，通过去除磁性标记的细胞来分离获得高纯度的T细胞。

应用例子：

                                          分选前PBMCs                                                    分选后获得的未标记Pan T细胞

                                                                                   

从pbmc中分离的未标记的T细胞。使用Pan T Cell Isolation Kit, human、LS柱和MidiMACS™分离器去除非T细胞。用CD2-PE和CD3-FITC标记细胞，在MACSQuant分析仪上进行流式细胞术分析。

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6、从PBMCs中分离naive/记忆T细胞

起始样本	分选类型	描述	产品
PBMCs	去除分选	记忆T细胞和非T细胞的去除，如B细胞、NK细胞、巨噬细胞、干细胞、血小板、粒细胞和单核细胞。包括可选的TCRγ/δ+ T细胞耗竭。	Naive Pan T Cell Isolation Kit, human
PBMCs	阳性分选	幼稚T细胞的分离，包括CD4+和CD8+细胞。CD62L不仅在T细胞上表达，而且在所有淋巴细胞上表达。	CD62L MicroBeads, human
PBMCs	阳性分选	幼稚T细胞的分离，包括CD4+和CD8+细胞。CD45RA也在CD8+ TEMRA细胞上表达。CD45RA的表达不仅局限于T细胞，其他淋巴细胞也能表达。	CD45RA MicroBeads, human
PBMCs	阳性分选	CD4+和CD8+记忆T细胞的分离或去除。CD45RO在CD8+ TEMRA细胞上不表达。CD45RO的表达不仅局限于T细胞，其他淋巴细胞也能表达。	CD45RO MicroBeads, human

Naive Pan T Cell Isolation Kit, human，提供快速和有效的从人PBMCs中分离未标记的幼稚T细胞。为了去除记忆T细胞和非T细胞，PBMCs与生物素化的CD45RO、CD14、CD15、CD16、CD19、CD25、CD34、CD36、CD57、CD123、Anti-HLA-DR、CD235a（糖蛋白a）和CD244抗体混合培养。选择性地，可以添加生物素化抗TCRγ/δ抗体，以消耗TCRγ/δ+ T细胞。随后，用抗生物素微珠对细胞进行磁性标记。添加CD61微珠用于同时消耗血小板。

                     分选前PBMCs细胞                                                                   分选后获得未标记naive Pan t细胞

                                                       

通过消耗非T细胞有效地分离未接触的初始T细胞。使用Naive Pan T细胞分离试剂盒、LS柱和MidiMACS分离器对PBMCs进行分离。细胞用CD3-VioBlue、CD197-PE和CD45RA-FITC标记，然后在MACSQuant分析仪上进行流式细胞术分析。

CD62L MicroBeads, CD45RA MicroBeads，或CD45RO MicroBeads用于根据提供的marker阳性选择相应的细胞。CD62L+、CD45RA+或CD45RO+ T细胞的分离可以通过将这些MicroBeads与能够分离未标记T细胞的试剂盒（如Pan T Cell Isolation Kit, human）结合使用来完成。

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7、分离活化T细胞

起始样本	分选类型	描述	产品
PBMCs	阳性分选	CD137参与CD4+、CD8+ T细胞和NK细胞的活化和生存。	CD137 MicroBead Kit, human
PBMCs	阳性分选	CD154在CD4+T细胞上表达上调	CD154 MicroBead Kit, human
PBMCs	阳性分选	CD25是低亲和力的白细胞介素-2受体α链（IL-2Rα），在活化的T细胞、B细胞和单核细胞上表达。CD25也存在于非活化的CD4+ T细胞亚群中，具有调节功能（Treg细胞）。	CD25 MicroBeads II, human
PBMCs	阳性分选	CD30在活化的T细胞和B细胞的小亚群上表达，但在静止的淋巴细胞或单核细胞上没有发现。	CD30 MicroBeads, human
PBMCs	阳性分选	CD69在活化的T细胞、B细胞和NK细胞上表达，而在静止的淋巴细胞上不表达。它在淋巴细胞活化后迅速上调，也在活化的巨噬细胞和其他细胞类型（包括中性粒细胞、嗜酸性粒细胞和血小板）上表达。	CD69 MicroBead Kit II, human

根据T细胞亚型和激活方式的不同，激活标记物和细胞因子分别包括CD25 （IL2RA）、CD30、CD38、CD69、CD95 （FASR）、CD137 （4-1BB）、CD154 （CD40L）和IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-9、IL-13、il - 17、TNF-α、IFN-γ。有关使用这些标记物识别活化T细胞的详细信息，请参见下面的流式细胞术表征T细胞。抗原活化T细胞的特异性和细胞治疗的潜力，然而，抗原特异性T细胞在外周血中频率低至所有T细胞的0.01%，这种低频使细胞处理及检测至关重要。

CD137主要表达在活化的CD4+和CD8+ T细胞、活化的B细胞和自然杀伤细胞上，但也可以在静止的单核细胞和树突状细胞上发现。CD137已被描述为抗原特异性激活人CD8+ T细胞的合适标记物，因为CD137在静止的CD8+ T细胞上不表达，并且在刺激24小时后可诱导其表达。CD154抗体特异性识别人类CD154抗原，也被称为CD40L、gp39、T-BAM、TRAP或Ly-62。CD154在活化的CD4+ T细胞上瞬间上调，并通过CD40的连接在T细胞/抗原呈递细胞相互作用中作为共刺激分子发挥重要作用。

应用例子：

整个BK病毒反应性CD4+ T细胞功能亚群的表征。

表征的细胞包括TNF-α−、IFN-γ−和产生il -2的T细胞。根据快速ARTE的实验流程，首先使用CD154 MicroBead Kit， human富集细胞。

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8、分离“非常规”T细胞亚群

起始样本	分选类型	描述	产品
PBMCs	阳性分选	通过T细胞受体（TCRγ/δ）的γ/δ变体进行直接免疫磁分离	Anti-TCRγ/δ MicroBead Kit, human
PBMCs	去除分选	非tcrγ /δ+ T细胞（TCRα/β+ T细胞、NK细胞、B细胞、树突状细胞、粒细胞、单核细胞、干细胞和红细胞）通过免疫磁分离间接标记和去除。	TCRγ/δ+ T Cell Isolation Kit, human
PBMCs	阳性分选	基于TCR α-链Vα24-Jα18表达的人自然杀伤T细胞（iNKT细胞）阳性选择。	Anti-iNKT MicroBeads, human
PBMCs	去除分选	NK细胞和单核细胞首先被磁性标记并去除。然后使用CD56 MicroBeads从预富集的NKT细胞中选择CD3+CD56+ NKT细胞。	CD3+CD56+ NKT Cell Isolation Kit, human
PBMCs	去除非靶细胞，再阳性分选靶细胞	CD4-CD8-CD56-CD3 +TCRα/β+细胞通过两步法从pbmc中分离。	Double-negative T Cell Isolation Kit, human

γ/δ T细胞（γ/δ T细胞）表面有一个独特的T细胞受体（TCR），由一条γ链和一条δ链组成，而“传统的”α/β T细胞则表达由α和β TCR链组成的TCR。由于大多数T细胞是α/β T细胞，γ/δ T细胞相对较少（<外周血中所有T细胞的10%），在肠粘膜的淋巴细胞群中显示出最高的丰度，称为上皮内淋巴细胞。

TCRγ/δ+ T细胞分离试剂盒（TCRγ/δ+ T Cell Isolation Kit, human）用于从pbmc中分离未标记的人γ/δ T细胞。非tcrγ /δ+细胞用生物素化单克隆抗体和抗生物素微珠的混合物间接磁标记。磁性标记的非tcrγ /δ+细胞在MACS分离器的磁场中保留在柱上，而未标记的γ/δ+ T细胞则通过。

CD3+CD56+ NKT Cell Isolation Kit, human，用于顺序分离CD3+CD56+ NKT细胞从人pbmc和其他单细胞悬浮液。

调节性T细胞下调免疫应答在诱导耐受性中起关键作用。据报道，TCRα/β+ CD4-CD8 -双阴性T细胞也具有特异性下调对同种抗原的免疫反应的能力，无论是在人类还是小鼠中。双阴性T细胞既存在于淋巴组织，也存在于非淋巴组织。它们约占外周血CD3+细胞的1-3%。

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应用例子：

                        分选前PBMCs                            在CD4+、CD8+和CD56+细胞去除后预富集双阴性T细胞              分选双阴性T细胞后

                                                                                                       

双阴性T细胞的分离。采用Double-negative T Cell Isolation Kit, human、1个LD柱、2个MS柱、1个 MidiMACS分离器和1个MiniMACS分离器从人外周血PBMCs中分离TCRα/β+ CD4-CD8 -双阴性T细胞。并用Anti-Biotin-FITC对细胞进行荧光染色。

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9、T细胞的培养、激活和扩增

产品类型	描述	产品名称	品牌
细胞培养基	GMP级的T细胞培养基，不含血清或动物源性成分。	TexMACS™ GMP Medium (Phenol Red)	美天旎
细胞培养基	用于培养和扩增人T细胞，含预先筛选的血清、稳定的谷氨酰胺和酚红等	Human T cell Expansion Medium	金准生物
营养补充试剂	高质量的重组细胞因子，可适用于细胞培养。可提供优质，研究和MACS GMP等级。	MACS Cytokines	美天旎
细胞刺激试剂	通过CD3/CD28结合的纳米基质激活T细胞。可分为研究型、MACS型和GMP级。	T Cell TransAct	美天旎
细胞刺激试剂	细胞大小的活化微珠（“人工抗原呈递细胞”）装载活化CD2、CD3和CD28抗体。	T Cell Activation/Expansion Kit, human	美天旎
细胞刺激试剂	葡萄球菌肠毒素B （SEB）的无毒替代品。作为一种超抗原。	CytoStim	美天旎
细胞刺激试剂	广泛的肿瘤、病毒、真菌和微生物群特异性抗原，用于刺激抗原特异性CD4+和CD8+ T细胞。可在优质，研究和MACS GMP等级以及在96孔细胞培养板中进行	PepTivator Peptide Pools	美天旎
细胞刺激试剂	体外T细胞的活化和扩增。	CD3 pure – functional grade, human ；CD28 pure – functional grade, human	美天旎

人T细胞在不同培养基中扩增率的比较。细胞扩增使用人T细胞活化/扩增试剂盒（T Cell Activation/Expansion Kit, human）与其他厂商产品TexMACS Medium或含血清的基础培养基（RPMI + 10% FBS）联合扩增。

活化人纯化的T细胞。使用Pan T Cell Isolation Kit, human分离的T细胞在添加人IL-2的TexMACS培养基中使用T Cell TransAct活化48小时。使用MACSQuant®分析仪对细胞进行荧光染色和流式细胞术分析。

T Cell Activation/Expansion Kit, human，使用大细胞大小的颗粒装载生物素化抗体的选择，以激活和扩增原代细胞。大细胞大小的颗粒模拟抗原呈递细胞，当装载CD2， CD3和CD28抗体并以特定的细胞比应用时，导致有效的T细胞激活。下面的导图有助于为特定的实验找到正确的T细胞激活产物。